Мир науки

Рефераты и конспекты лекций по географии, физике, химии, истории, биологии. Универсальная подготовка к ЕГЭ, ГИА, ЗНО и ДПА!

Загрузка...

Метод имунопреципитации (ChIP? Chromatin ImmunoPrecipitation) является мощным средством установления наличия

белка в определенном участке ДНК in vivo (рис. 11.17). Для этого клетки обрабатывают формальдегидом с целью ковалентного пришивания всех белков к ДНК. Далее осуществляют лизис клеток, выделяют ДНК и частично ее фрагментируют. Ковалентные ДНК-белковые комплексы осаждают антителами, специфичными к конкретному белка (или пропускают через колонку, на которой иммобилизованные антитела). Полученные комплексы разрушают, удаляя сшивку химическим путем, и анализ ДНК, которая была связанной в клетке с данным белком. Одним из вариантов анализа может быть амплификация ДНК с помощью ПЦР и последующее секвенирование или гибридизация с меченым зондом.

Если, например, сделать сшивания в разные моменты после регуляторного сигнала, то можно установить последовательность связывания белков с регуляторными участками промотора определенного гена. Если белок имеет многочисленные сайты взаимодействия в геноме, до всех полученных фрагментов ДНК пришивают промотор РНК-полимеразы бактериофага Т7 и с помощью полимеразы осуществляют транскрипцию in vitro? синтез РНК-копий фрагментов. Далее используют эти РНК в качестве матрицы для обратной транскрипции в присутствии флуоресцентного аналога одного из NTP и полученные флуоресцентно меченые кДНК гибридизують с ДНК-микроареем, выясняя уровень присутствия белка в различных участках генома.



Загрузка...
Загрузка...
Яндекс.Метрика
Биология      Физика      Химия      Экономика     География
Микробиология      Теоретическая механика     География Белоруссии    География Украины    География Молдавии
Растительность мира      Электротехника    География Грузии    География Армении    География Азербайджана
География Казахстана    География Узбекистана    География Киргизии    География Туркменистана    Природоведение
География Таджикистана    География Эстонии