Мир науки

Рефераты и конспекты лекций по географии, физике, химии, истории, биологии. Универсальная подготовка к ЕГЭ, ГИА, ЗНО и ДПА!

Загрузка...

Исторически первым методом наблюдения достаточно больших макромолекулярных комплексов с разрешением в

манометров диапазоне стала электронная микроскопия. При применении этого метода образец помещают в вакуумной камере микроскопа, облучают лучом электронов, который дальше проецируется на флуоресцентный экран. Образец при этом должно быть? Закрашен? определенным веществом, непрозрачной для электронов.

Одна из распространенных техник заключается в том, что макромолекулы наносят на карбоновую подложку, практически прозрачную для электронного луча (как и макромолекулы), и фиксируют на ней. Затем подложку промывают раствором соли тяжелого металла, например уранилацетатом. После высушивания такая подложка становится непрозрачной для электронов везде, кроме участка, где находится макромолекула, и уранилацетатом не связался с подложкой. Такая техника негативного контраста позволяет наблюдать под электронным микроскопом молекулы ДНК, комплексы ДНК с белками (например, нуклеосомы), мультибилкови комплексы и т.д.. Разделение при отрицательном контрасте лимитированное размером частиц тяжелого металла.

Важным вариантом электронной микроскопии, который позволяет избежать фиксации и контрастности образца, является криоэлектронной микроскопия. Тонкий слой (~ 100 нм) раствора макромолекул на подложке быстро замораживается до 160 ° C и при этой температуре находится в охлажденной вакуумной камере микроскопа. Оказывается, что такие образцы дают достаточно высокий уровень контраста без дополнительной обработки. Криоэлектронной микроскопия сыграла важную роль в исследованиях структуры и механизмов функционирования рибосомы. Современной альтернативой электронной микроскопии является микроскопия атомных сил (AFM? Atomic Force Microscopy). Макромолекулы адсорбируются на подложке, после чего образец может быть исследованным как после высушивания, так и в случае, когда остается слой жидкости.

Подкладка сканируется иглой с чрезвычайно тонким острием, которое за счет межатомных (вандерваальсовы) сил взаимодействует с поверхностью, отслеживая ее ландшафт? (Рис. 11.18). Движение иглы регистрируется оптической системой (лазерный луч отражается от иглы на фотодиод), и превращается компьютером изображение поверхности. Разрешение сопоставимо с таким электронного микроскопа, однако, в отличие от электронной микроскопии, AFM не требует фиксации и контрастности образца, позволяющий работать с макромолекулами, находящихся в условиях, близких к физиологическим. Кроме того, существует возможность количественной оценки высоты смещение иглы относительно поверхности подложки.



Загрузка...
Загрузка...
Яндекс.Метрика
Биология      Физика      Химия      Экономика     География
Микробиология      Теоретическая механика     География Белоруссии    География Украины    География Молдавии
Растительность мира      Электротехника    География Грузии    География Армении    География Азербайджана
География Казахстана    География Узбекистана    География Киргизии    География Туркменистана    Природоведение
География Таджикистана    География Эстонии