Для изучения морфологии микроорганизмов необходим микроскоп. В микробиологии используют два вида микроскопии – электронную и световую.
А. Электронная микроскопия используется специализированными лабораториями.
1. Для ее осуществления необходим электронный микроскоп. Принцип его действия заключается в том, что вместо световой волны используется пучок электронов, что позволяет увеличить чувствительность метода на несколько порядков.
3. Электронная микроскопия используется для обнаружения и изучения вирусов, а также для изучения ультраструктуры бактериальной клетки.
Б. Световая микроскопия может использоваться и обычными лабораториями.
1. Обычная световая микроскопия используется в микробиологической практике сравнительно ред-ко. В обиходе микробиологов этот метод часто называется «сухим», в противоположность иммерсионному методу микроскопии.
а. Для этого вида микроскопии используется обычный биологический микроскоп.
б. Принцип действия этого микроскопа рассматривается в курсе физики.
в. «Сухой» объектив может использоваться, например, для микроскопирования препарата «придав-ленная капля» при определении подвижности бактерий.
2. При иммерсионной микроскопии используется специальное иммерсионное масло.
а. В качестве иммерсионного микроскопа служит обычный биологический микроскоп, но оснащенный специальным объективом (маркированным черной полосой).
б. Принцип метода заключается в том, что иммерсионное масло, обладая коэффициентом преломле-ния чрезвычайно близким к коэффициенту преломления стекла, делает потерю световых лучей на гра-нице сред предметное стекло/масло и масло/стекло объектива минимальной, что улучшает качество микроскопической картины и увеличивает разрешающую способность микроскопа.
в. Именно иммерсионная микроскопия используется в бактериологии наиболее часто.
3. Более редко в бактериологии используется темнопольная микроскопия.
а. С этой целью обычный биологический микроскоп оснащается специальным темнопольным конденсором.
б. Принцип его действия заключается в том, что все прямые лучи минуют объектив, куда попадают лишь те из них, которые преломились на объекте микроскопирования. Поэтому микроорганизмы видны как светящиеся объекты на темном фоне.
в. Темнопольная микроскопия наиболее часто используется для обнаружения спирохет, так как позволяет визуализировать очень тонкие объекты.
4. В ряде случаев в бактериологических лабораториях используется фазово-контрастная микроскопия.
а. Для этого обычный биологический микроскоп оснащается специальной приставкой с особым набором линз.
б. Принцип её действия заключается в том, что смещение фазы световой волны, происходящее при её прохождении через прозрачные для нашего глаза объекты и не воспринимаемое человеческим глазом (собственно именно поэтому такие объекты и выглядят прозрачными), преобразовывается в изменение амплитуды световой волны. А изменение этого параметра воспринимается нашим глазом – объект становится видимым.
в. Фазово-контрастная микроскопия используется, как правило, для обнаружения очень тонких (на-пример, спирохеты, жгутики бактериальной клетки) или высоко прозрачных (например, микоплазмы) объектов.
5. И бактериологические и иммунологические и вирусологические лаборатории не могут считаться современными без возможности использования люминесцентной микроскопии.
а. Для этой цели служит особый люминесцентный микроскоп. Принцип её действия заключается в том, что используемые при обработке мазка для этого вида микроскопии особые, люминесцентные, красители вызывают свечение микроскопируемого объекта под воздействием коротковолнового (чаще всего – синего) света, которым он освещается (явление на-ведённой люминесценции).
в. Люминесцентная микроскопия широко используется в современной микробиологии.
1. Для выявления в мазке некоторых видов бактерий используются специальные флюоресцентные красители, обуславливающие специфическое свечение изучаемых микроорганизмов.
а. Для выявления возбудителя сибирской язвы используется родамин.
б. Красное свечение зёрнам волютина, наличие которых позволяет идентифицировать коринебакт-рии, обуславливает корефосфин.
в. Аурамин используется для выявления микобактерий туберкулёза, которые, при обработке мазка этим флюорохромом и микрокопировании его в люминесцентном микроскопе, выглядят как жёлтые палочки на зелёном фоне.
2. Люминесцентная микроскопия используется также для оценки реакции иммунофлюоресценции. Если антитела диагностической сыворотки адсорбируются на поверхности клетки, содержащей выявляемый антиген, то в люминесцентном микроскопе такая клетка будет окружена жёлто-зелёным обод-ком, так как антитела флюоресцирующей сыворотки метятся специальным флюорохромом – флюо-ресцеинизотиоционатом натрия (ФИТЦ).