Большие пре-В-лимфоциты. После удачного завершения процессов перестройки сегментов в Н-локусе генов иммуноглобулинов предшественники В-клеток переходят к следующей стадии дифференцировки.
Природа пытается сохранить такие клетки и увеличить их количество, поскольку процесс реаранжування генов не всегда приводит к продуктивному результату. Поэтому клетки с перестроенной генами тяжелой цепи начинают размножаться и образовывать клон. Во время размножения пре-В-клетки приобретают морфологии бластных клеток, поэтому они имеют большие размеры, из-за чего и получили свое название. В больших пре-В-клгтнах не наблюдается наличие активных ферментов-рекомбиназ RAG1 и RAG2 и фермента TdT, хотя в цитоплазме содержится мРНК этих ферментов. Каждая такая клетка может осуществить около шести разделов, а следовательно, создать клон из 64 одинаковых пре-В-клеток. На поверхности больших пре-В-клеток всегда содержится пре-ВКР, хотя функциональное значение его экспрессии остается неизвестным. Такие клетки продолжают экспрессировать рецепторы к ИЛ-2 и ИЛ-7, а также приобретают новые поверхностных маркеров - аминопептидазы ВР-1, молекулу CD24 т.д..
Маленькие пре-В-клетки. После размножения больших пре-В-клеток они уменьшают свои размеры и начинают реаранжуваты гены легкой цепи иммуноглобулинов. Для этого снова активируется экспрессия генов RAG1 и RAG2. Сначала происходит перестройка генных сегментов в к-локусе генов легкой цепи. При этом наблюдается явление аллельных исключения. Как правило, первая рекомбинация приближает определенный с-сегмент до Jк1-сегмента. Правильно перестроен к-цепь экспрессируется вместе с тяжелым ц-цепью на поверхности В-клетки. Если такая экспрессия становится возможной, дальнейшие процессы перестройки прекращаются, а если первая VJ-рекомбинация генов к-ланнцюга оказывается непродуктивной, - включается рекомбинация генов на другой хромосоме. При непродуктивности рекомбинации в обоих к-локусах включается перестройка генов в 1-локусе. Поэтому у мышей соотношение иммуноглобулинов из к-цепью к иммуноглобулинов с 1-цепью составляет 10:1. У человека это соотношение примерно 3:1. Итак, после завершения стадии малых пре-В-лимфоцитов образуются незрелые В-клетки, которые имеют сложившиеся IgM-рецепторы к антигену, но еще не прошли отрицательного отбора. IgM-рецептор экспрессируется на мембране вместе с молекулами, необходимыми для передачи сигнала ( а и Igß, фосфатазой CD40R, корецепторов CD 19), а также МНСИИ и другими маркерами (CD20, CD24, CD40, ВР-1 и др.). Маленькие В-лимфоциты теряют экспрессию рецепторов к интерлейкинов 2 и 7.
Итак, антагеннезалежний развитие В-лимфоцитов связан с перестройкой генов их рецепторов. Главным следствием его должно быть экспрессия полноценного белкового продукта, который может считываться с перестроенных генов и экспрессироваться на мембране клеток. О-В-лимфоциты перестраивают гены тяжелой цепи иммуноглобулинов, а пре-В-лимфоциты - легкой. Во время этих перестроек происходит проверка правильности перестройки, которую можно рассматривать как положительный отбор В-лимфоцитов. 7
У мыши за сутки образуется приблизительно 510 незрелых В-клеток. В-клетки, образовавшиеся в результате антагеннезалежного дифференцировки, испытывают отрицательного отбора. Подсчитано, что на периферию поступает лишь 10% образующихся в костном мозге клеток. Все остальные В-клетки, как полагают, погибают вследствие апоптоза благодаря аутореактивности их рецепторов.