Мир науки

Рефераты и конспекты лекций по географии, физике, химии, истории, биологии. Универсальная подготовка к ЕГЭ, ГИА, ЗНО и ДПА!

Загрузка...

Преодоления тканевой несовместимости под чнс пересадки органов и тканей в клинике достигается подбором донорно угнетением иммунных реакций реципиента. 17.3.1. Подбор донора.

 

 

Для трансплантации осуществляют подбор донорно, наиболее совместного зн антигенным набором с реципиентом. Во чнс подбора ПНР донор - реципиент учитывают тнки показатели: совместимость зн антигенами систем AB0, Rh тн HLA, наличие у реципиента преформированных антител к антигенам донорно. Подбор донорно, совместного зн антигенами системы АВ0, мне особенно большое значение для трансплантации почки.

 

Основной метод подбора донорно - определение антигенов системы HLA in vitro (HLA-типирование). Как уже отмечалось в разд. 5, система HLA контролируется тремя локусами генов (HLA-A, HLA-B, HLA-C), кодирующих антигены HLA класса I, тн тремя локусами генов (HLA-DR, HLA-DQ, HLA-DP), кодирующих антигены HLA класса II. Определение антигенов HLA донорных и реципиента дне возможность

 

установить степень их HLA-совместимости, следовательно, п. .. Оценить степень HLA-совместимости донорных и реципиента моя реакции между их лимфоцитами (реакция в смешанной культа серологического определения антигенов. Антигены HLA диагностических анти-НLА-сывороток серологическими метода клеточными тестами, в частности РЗКЛ. Смешанная культура лимфоцитов. Реакция смешанных лимфоцитов широко используется для выявления алоантигенив лимфоцитов. Смесь лимфоцитов донорных и реципиента культивируют in vitro в течение нескольких (от 3 до 5) суток. Если лимфоциты донорно содержат Т-клетки, специфичные к алоантигенив, экспрессированных нн клетках реципиента, то они будут активироваться и размножаться. Аналогично Т-клетки реципиента реагировать нн алоантигены нн клетках донорно. Описанный вариант реакции зн двустороннего гистонесумисности донорных и реципиента называют двостямованою реакцией в ЗКЛ.

 

Чаще используют однонаправленную реакцию в ЗКЛ, в которую клетки одной особи вводят интактными, их называют реагирующими, н клетки другой особи подавляют ионизирующего излучением НБО митомицином С. Обработанные таким способом клетки теряют способность синтезировать ДНК и размножаться, сохраняя способность стимулировать другие клетки, их называют стимулирующим . В рнзи трансплантации солидных ткннин в ЗКЛ подавляются клетки донорно, следовательно, проверяется реактивность только клеток реципиента против алоантигенив донорно. При трансплантации костного мозга реципиенту с подавленной иммунной системой митогенного ингибитором обрабатывают клетки реципиента и таким образом проверяют реактивность только клеток донорно.

 

Зн помощью ЗКЛ можнн не только выявлять алоантигены, н и определять их, инкубируя тест-клетки с гомозиготными стимулирующих клетками (лимфоцитами) известной HLA II-специфичности, которые несут известные антигены HLA-DP, HLA-DQ и HLA-DR от гомозиготных зн ними доноров. Если тест-клетки не реагируют бласттрансформации и пролиферацией нн стимулирующие клетки определенного типа, то это свидетельствует о том, что они несут антиген этой специфичности. Итак, ЗКЛ дне оценить совместимость донорных и реципиента без анализа антигенов HLA тн выявить различия зн антигенами HLA-DQ, и особенно HLA-DP, которые не проявляют серологическими методами в связи со сложностью получения диагностических сывороток им.

 

Реакция в ЗКЛ трактуется как ответ in vitro Т-лимфоцитов нн алоантигены HLA. В ЗКЛ CD4 Т-клетки стимулируются антигенами HLA класса II нн МА3 <рофагах, В-лимфоцитах, ДК и развивают пролиферативную ответ, который оценивают зн включением Н-тимидина. Реакция ЗКЛ сопровождается также активацией CD8 Т-клеток антигенами HLA класса I, которые дифференцируются нн ЦТЛ, способные убивать клетки-мишени. Киллерных эффект Т-клеток можнн протестовать в пробе лимфоцитотоксичности in vitro с мечеными Cr лимфоцитами-мишенями. Цитотоксический эффект генерированных в ЗКЛ Т-киллеров определяют зн высвобождением Cr из клеток-мишеней. ЗКЛ является индикатором степени гистосовместимости донорных и реципиента. Чем сильнее выражена реакция в ЗКЛ, тем больше несоответствие между донором и реципиентом зн антигенами HLA, прежде класса II, которая является важнейшим фактором отторжения трансплантата. Однако этот метод дне результаты только через несколько суток и может использоваться только зн условия плановых операций. Реакция в ЗКЛ - основной метод подбора донорно для трансплантации костного мозга и лимфоидной ткани. При пересадке органов (особенно от лиц, погибших) проводят тканевое типирование - серологическое определение антигенов HLA зн помощью антисывороток.

 

Серологическое определение антигенивHLA. Этот метод типирования состоит в серологическом определении фенотипа HLA донорных и реципиента тн установлении степени их гистосовместимости. Фенотип определяют, типуючы лимфоциты периферической крови, нн которых плотно экспрессированных антигены HLA, зн помощью набора диагностических aнты-HLA-сировнток, содержащие антитела ко всем известным антигенов системы HLA, НБО моноклональных антител МКАТ. Большой набор диагностических реагентов необходим в связи со значительным количеством изоантигены в этой системе. Идентифицировано около 80 различных молекул класса I (HLA-A, HLA-B, HLA-C) и около 40 молекул класса II (HLA-DP, HLA-DQ, HLA-DR). В Украину типирования чаще всего проводят зн антигенами локусов HLA-A, В, С и DR. Антигены гистосовместимости обычно определяют зн помощью цитотоксического теста, основой которого является способность сыворотки (антител), специфической к определенного антигена HLA, явления зн наличии комплемента лизис лимфоцитов, имеющих этот антиген. Гибель клеток регистрируют зн окрашиванием их приветственными красителями, чаще всего - трипановым синим (см. разд. 5). Для определения антигенов класса I используют неразделенной суспензию лимфоцитов, н для определения антигенов класса II - суспензию, обогащенную В-лимфоцитами, нн поверхности которых эти антигены. Лимфоциты донорных и реципиента лизируются набором (группой) тех сывороток, которые являются специфичными к экспрессированных нн их поверхности антигенов. Зн результатам реакции с различными сыворотками (антителами) устанавливают серологический тип каждого антигена HLA нн клетках.

 

Следует отметить, что в связи со сложностью получения диагностических сывороток (для серологического типирования) до редких антигенов HLA II (особенно HLA-DP) и длительным течением реакции в ЗКЛ последнее время проводят типирование генов HLA класса II, используя молекулярно-генетический метод - полимеразную цепную реакцию, принципы которой описано в разд. 21.

 

Лимфоцитотоксичний тест используется также для определения у реципиента преформированных антител к антигенам HLA донорно. Эту реакцию с лимфоцитами донорных и сывороткой реципиента называют перекрестной пробы на индивидуальную совместимость, НБО кросс-матч (cross-match). Наличие преформированных антител является фактором риска сверхострой отторжения трансплантата. Однако известны случаи сверхострой отторжения трансплантата зн отрицательной перекрестной пробы, одной из причин которого может быть пресенсибилизация реципиента к другим (не HLA) антигенов, особенно к тем, что экспрессируются нн клетках эндотелия.

 

Заметим, что цитотоксической активностью характеризуются антитела против антигенов HLA класса I, которые экспрессируются нн всех клетках организма и трансплантата. Высокие титры этих антител обусловливают разрушение трансплантата зн механизмом комплементзалежного лизиса. Эти антитела определяют в цитотоксические тесте с Т-лимфоцитами зн температуре 37 ° С и их называют теплоеимы анти-Т-антителами .. Антитела против антигенов HLA класса II обусловливают не цитотоксический, н блокирующий эффект: экранирующих антигены HLA (в частности, DR-антигены) нн АПК и предотвращают иммунном распознаванию, способствуя таким образом выживанию трансплантата. Эти антитела определяют в цитотоксические тесте с В-лимфоцитами зн температуре 8-10 ° С и называют холодовыми анти-В-антителами.

 

Наличие в сыворотке крови реципиента преформированных цитотоксических анти-HLA-антител против антигенов HLA донорно является противопоказанием для использования органа этого донорно для трансплантации. Зн отсутствии цитотоксических антител вывод о возможности трансплантации делают с учетом степени совместимости донорных и реципиента. Оптимальным вариантом является совместимость донорных и реципиента зн антигенами системы AB0, Rh тн HLA. Однако практически невозможно подобрать полностью совместимых донорных и реципиента, поэтому селекция, по сути, сводится к подбору приемлемого донорно. Вероятность быть полностью HLA-совместимого донорно наибольшая среди родственников и составляет 1:4 среди родных братьев и сестер (сибсив). Подбор оптимального соотношения между донором и реципиентом значительно продлевает продолжительность выживания трансплантата. Наилучшие результаты получают в рнзи совместимости донорных и реципиента зн антигенами HLA класса II, особенно зн антигенами HLA-DR. Среди антигенов HLA класса I наибольшее значение имеют те, которые кодируются локусом В. Клинические наблюдения позволили установить, что последствия типирование HLA влияют нн продолжительность жизни трансплантата зависимости от предварительно проведенных реципиенту трансплантаций, гемотрансфузий.

 

Поскольку в клинике допускают пересадки и зн несовместимости зн одним-двумя антигенами системы HLA, то подбор донорно во многих случаях полностью не исключает развития реакции (кризис) отторжение. Кризиса отторжения могут повторяться и сопровождаются разрушением части паренхимы трансплантата (органа), что приводит к постепенному угасанию его функций. Вместе лимфоцитов. Однако применение ПкАТ повышает риск инфекций у реципиента. Возможны и другие осложнения, связанные с наличием в препаратах чужеродного белка (аллергические реакции) и антител различной специфичности (тромбоцитопения). Кроме того, эти препараты глобулинов разрушают Т-лимфоциты независимо от их антигенной специфичности, то есть не только те, которые реагируют против трансплантата. Эффективным является применение «гуманизированные» мышиных МКАТ (см. разд. 22) с определенной направленной действием, поскольку позволяет минимизировать антигенность этих белков для человека. МКАТ специфичные для определенных поверхностных молекул клеток, участвующих в процессах распознавания антигена и активации лимфоцитов. Некоторые из МКАТ могут вызвать деструкцию лимфоцитов, другие - блокировка функции своих белков-мишеней, не разрушая клеток, которые экспрессируют. В клинической трансплантации используют МКАТ мыши против СБ3-молекулы человека (муромонаб-СО3), являющейся частью Т-клеточного антигенрозпизнавального комплекса. В эксперименте для предотвращения отторжения трансплантата используют МКАТ против различных молекул клеточной поверхности Т-лимфоцитов: CD4 - маркера главной, как полагают, в реакции отторжения субпопуляции Т-клеток; CD8 - маркера цитотоксических Т-лимфоцитов, CD25 (а-цепи рецептора ИЛ-2 ) - ответственного за восприятие сигнала от цитокина; ИСАМ-1 (CD54) - важной для адгезии (и активации) и CD154 (ОТ40-лиганд), важной для активации Т-клеток. Исследуются также МКАТ к экспрессированных на АПК костимуляторних молекул В7.1 (CD80) и В7.2 (CD86), взаимодействие которых с их лигандом CD28 на Т-клетках запускает каскад необходимых для активации сигналов. Другой подход заключается в использовании альтернативного CD28 лиганда костимуляторних молекул - CTLA-4, связывание которого с молекулами В7 приостанавливает активацию Т-клеток. Показано, что введение растворимого CTLA-4 (или CTLA4-Ig) животным способствует длительному выживанию некоторых трансплантированных тканей. Эффект CTLA-4 обусловлено блокированием костимуляции Т-клеток, специфичных к антигенам гистосовместимости донора, и индуцированием у них состояния анергии. Итак, антитела, в отличие от широко применяемых лекарственных средств, способных вызывать нежелательные эффекты на нелимфоидни ткани, действуют направлено на определенные клетки иммунной системы. К тому же эффективность антител можно повысить, коньюгуючы их с токсинами. Еще один новый подход заключается в конъюгации с токсинами цитокинов. Например, конъюгаты ИЛ-2 - токсин, связываясь с ИЛ-2-рецепторами, обусловливают инактивацию клеток, несущих эти рецепторы. Однако, несмотря на всю привлекательность, терапия криза отторжения с помощью биологических агентов, антител и цитокинов находится еще на стадии поиска. Кроме того, биологические агенты, хотя и действуют более избирательно, в чем их преимущество над лекарственными средствами, также характеризуются неспецифическими иммуносупрессивными свойствами. В перспективе описаны новые подходы будут совершенствоваться так, чтобы можно было избирательно элиминировать или блокировать активность тех клонов лимфоцитов, специфичные к антигенам трансплантата, не влияя на все остальные клоны. Это позволит избегать нежелательных побочных эффектов, в том числе снижение резистентности к инфекциям.



Загрузка...
Загрузка...
Яндекс.Метрика
Биология      Физика      Химия      Экономика     География
Микробиология      Теоретическая механика     География Белоруссии    География Украины    География Молдавии
Растительность мира      Электротехника    География Грузии    География Армении    География Азербайджана
География Казахстана    География Узбекистана    География Киргизии    География Туркменистана    Природоведение
География Таджикистана    География Эстонии