Этот метод используют, когда связывание антигена изменяет оптические параметры антител
, например, гасит флуоресценцию остатков триптофана в активном центре. Каждому значению концентрации антигена соответствует свое значение флуоресценции и можно рассчитать концентрации свободного и связанного антигена.
Методы определения Ка является частью большой группы методов изучения взаимодействия антигена с антителом, которые используются также для определения присутствия и количества антигенов и антител в биологических смесях. Они необходимы, например, для диагностики различных физиологических состояний организма. Так, диагностика беременности - это часто определение трофобласт-специфического глобулина в крови или моче женщины. Диагностика многих эндокринных нарушений требует точного определения уровня того или иного гормона. При инфаркте миокарда одной из самых ранних признаков некротического процесса, что происходит, является появление в крови миоглобина сердечной мышцы, уровень которого коррелирует с объемом поражения. Использование для этого именно иммунохимических методов является предпочтительным, поскольку они базируются на высокой специфичности взаимодействия антиген-антитело. Использование моноклональных антител позволило максимально стандартизировать эти методы, сделать их надежными и воспроизводимыми.
С другой стороны, определение антител в сыворотках или других биологических жидкостях тоже часто является необходимым, например, для оценки успешности
вакцинации. Определение антител против вируса СПИДа является главным диагностическим тестом на заражение этим вирусом. Таким образом, определение антигенов и антител часто необходимо в клинической практике. Оно требует очень чувствительных методов, потому что большинство гормонов, ростовых факторов и антител находятся в организме в следовых количествах. Именно поэтому в последние десятилетия много внимания уделялось разработке чувствительных методов определения антигенов и антител.