Эксперимент широко используется для моделирования патологических процессов, дает возможность более глубоко изучить морфогенез и патогенез отдельных заболеваний, действие на организм различных лекарственных
препаратов, разработать методы оперативных вмешательств и изучить их последствия. Недостатком этого метода является то, что далеко не все заболевания, которые встречаются у человека, можно получить в эксперименте. "Эксперимент - это спровоцировано наблюдения" (Клод Бернал). Первым для подтверждения существования в организме кровообращения В.Гарвей провел эксперименты на собаках и людях. Он доказал, что кровь отходит от сердца к тканям по артериям возвращается обратно по венам. В эксперименте К . Берналом (1848) была доказана гликогенсинтезуюча функция печени; получено сахарным диабетом после удаления поджелудочной железы у собак (Й.Меринг, О.Минковський, 1889); создана холестериновая модель атеросклероза (М.Аничков, С.Халатов, 1912), с " выяснена медиаторных роль ацетилхолина (О. Леви, 1902). Непревзойденным мастером хронического эксперимента был И.П.Павлов.
Методы изучения патологической анатомии можно разделить на две группы: основные и дополнительные.
К основным морфологическим методам исследования относятся:
- Макроскопический (обзор и изучение невооруженным глазом);
- Микроскопический (световая и электронная микроскопия).
В древнейших методов морфологического познания болезни следует отнести исследования умерших как источник знаний об анатомии человека, начали выполнять еще в древние времена, а затем возродили во времена ренессанса. Первые анатомические атласы создавались крупными художниками того времени, например, Рембрандт создал "Атлас анатомии доктора Тульпа". Этих художников, в какой-то степени, следует рассматривать и как первых патологоанатомов и патогистологив, поскольку в их рисунках нередко встречаются и патологически измененные органы и ткани.
Световой микроскопии. Используется для первоочередного анализа материала.
ИНТРАОПЕРАЦИОННАЯ КОНСУЛЬТАТИВНАЯ ДИАГНОСТИКА опираясь на современные гистологические технологии позволяет установить патогистологу точный гистологический диагноз во время операции. Для этого используются следующие методики:
- Изготовление "замороженных" срезов, при этом блоки тканей быстро замораживаются, что дает возможность быстрого изготовления тонких срезов;
- Изготовление "контактных отпечатков" среза ткани на стекле;
- Взятие мазков;
- Исследование аспирационной жидкости.
Цитопатологии базируется на том, что морфологические изменения клеток коррелируют с патологическими процессами в органах или тканях. Возможность взятия материала из глубоко расположенных внутренних органов является достаточно безопасным и поэтому цитопатологии стала распространенным методом диагностики. Для исследований в цитопатологии используют:
- Клетки, которые в норме отшелушиваются из эпителиальных покровов, например, в мокроте или мочи
- Клетки, которые соскабливают из слизистых оболочек, например, при взятии мазков из шейки матки;
- Клетки, которые принимают при тонкоигольной аспирации из органов, таких как молочная железа, лимфоузлы, печень, почки, легкие или поджелудочная железа.
Электронная микроскопия используется в диагностике как дополнение к световой микроскопии и имуноцитохимии. Чаще всего она используется при исследовании:
- Биопсий почек у больных гломерулонефрит;
- Некоторых опухолей;
- Биопсий нервов и мышц;
- Биопсии пациентов при болезнях накопления, при которых обнаруживаются специфические внутриклеточные включения.
Дополнительными методами исследования являются химические (гистохимия, иммуногистохимия-), физические (авторадиография, рентгенография, рентгенструктурний анализ, УЗИ), биологические (бактериологические, гематологические методики, метод тканевых культур и т.д.) методы.
Гистохимия используется для определения в тканях различных веществ: ферментов, различных классов жиров, белков, гликопротеинов, углеводов, металлов. Например, для того чтобы установить определенный вид дистрофии необходимо только гистохимическое исследование на липиды, белки, углеводы и т.д.. Также некоторые виды гистохимических окрасок сочетают с экспресс-диагностикой на замороженных срезах
Иммуногистохимии базируется на специфических реакциях между диагностическими антителами и комплементарными к ним антигенами. Для того чтобы выявить места локализации антител, ткань обрабатывают антителами к первым антител, связанных или с красителем или ферментом. Этим метод определяют:
- Гормоны;
- Рецепторы;
- Компоненты цитоскелета;
- Молекулы адгезии клеток;
- Белки матрикса соединительной ткани, плазмы, ферменты;
- Онкофетальные антигены;
- Онкогены и их производные;
- Ядерные гены пролиферации;
- Бактерии, вирусы, простейшие, грибы;
- Дифференциальная диагностика опухолей (происхождения и их природу).
ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНАЯ ДИАГНОСТИКА ОПУХОЛЕЙ используется, когда:
1. В биопсии определяется вторичная опухоль, однако отсутствуют клинические проявления первичного очага. Например в биопсии обнаружена недифференцированная аденокарцинома, что не позволяет определить место ее происхождения. Однако при определении клеточных маркеров была установлена положительная реакция на простатический антиген, чем свидетельствует первичная опухоль образовалась в предстательной железе.
2. Определяется низкодифференцированных опухолях, гистогенез которой выяснить не возможно. Используя определенный набор антител удается установить сначала класс опухоли, а затем проводить еще более точный диагноз.
3. Опухоль имеет морфологическое строение, при которой невозможно определить эпителиальная она или лимфоидная. В этом случае используют антитела к цитокератинов или общего лейкоцитарного антигена (LCA), находящихся на лимфоцитах. При лимфоцитарной происхождении опухоль исследуют с помощью антител, которые определяют источник: В-клетка или Т-клетка или моноцитарно-макрофагальная.
4. Открытие микрометастазов в костном мозге или лимфатических узлах, если признаки диссеминации (распространения) опухоли не определяются. У 80% больных раком молочной железы после удаления первичной опухоли начинается развитие вторичных метастазов, поэтому очень важно их выявить для предотвращения этого процесса.
5. Уровень экспрессии некоторых антигенов может давать прогностическую информацию и влиять на выбор терапии. Например, известно, что злокачественные рака молочной железы прямо коррелирует со степенью экспрессии клетками опухоли рецепторов к эпидермального фактора роста. Опухоли гормонозависимых органов увеличивают экспрессию в соответствующих гормонов.