Люминесцентная (или флюоресцентная) микроскопия основывается на явлении люминесценции, то есть свойства живых структур светиться при условии поглощения лучей коротковолновой (ультрафиолетовой, фиолетовой или синей) части спектра. В таком случае длина волны флуоресценции всегда больше длины волны возбуждающего света.
Всем живым клеткам свойственна флюоресценция, которая называется собственной, или первичной. Она является слабой, и поэтому чаще используют так называемую вторичную флюоресценцию, когда объекты предварительно обрабатывают специальными красителями - флю-орохромамы. Из последних чаще всего употребляют акридина оранжевый. В случае его использования ядра клеток, содержащих ДНК, дают ярко-зеленое свечение, а цитоплазма вследствие наличия РНК - ярко-красное.
За последние десятилетия широкое распространение получили методы гистохимии, авторадиографии, иммуноморфология, цитоспектрофотометрии. Гистохимических методов дает возможность определить локализацию тех или иных химических веществ в различных структурных компонентах клеток и тканей. При гистохимических исследований вещества, входящие в состав клеток, реагирующих с химическими реактивами и образуют окрашенные продукты реакции, по которым можно определить как локализацию, так и (до некоторой степени) количественное содержание веществ в тех или иных структурах.
Основой авторадиографичного метода является использование радиоактивных изотопов и меченных ими соединений. Такие соединения вводят в организм подопытного животного, а затем радиоактивные вещества проявляют в гистологических срезах с помощью фотоэмульсии, которой покрывают препарат и проявляют. В тех местах, где фотоэмульсия контактирует с радиоактивным веществом, остаются засвеченные участки - треки. Этим методом можно исследовать обмен йода в щитовидной железе, образование нуклеиновых кислот, белков и т.д..
Загрузка...