Обе реакции сплайсинга осуществляются в составе специальной мультимолекулярных структуры сплайсосомы
(spliceosome), которая связана с CTD и образуется на каждом интроны с участием самой пре-мРНК, белков и особых молекул маленьких ядерных РНК (small nuclear RNA, snRNA). Маленькие ядерные РНК, которые синтезируются РНК-полимеразой II в соответствующих генах, сгруппированных в кластеры, играют ключевую роль в определении пространственной структуры, формировании и функционировании сплайсосомы. В сплайсинга принимают участие пять типов маленьких ядерных РНК (длиной 100? 200 нуклеотидов): U1, U2, U4, U5 и U6.
Маленькие ядерные РНК, которые существуют в клетке в виде комплексов со специфическими белками, имеют определенную пространственную структуру за счет образования комплементарных двойных спиралей? шпилек. Благодаря комплементарному спариванию с консенсусными последовательности интрона происходит их взаимодействие с пре-мРНК и другими маленькими ядерными РНК. Например, РНК U2 узнает консенсус в зоне разветвления, причем упомянутый адениновых нуклеотидов остается неспаренным? ? Випетльовуюеться? между соседними парами оснований (рис. 7.5). Именно это обстоятельство определяет его особый конформационно-напряженное состояние и, как следствие, повышенную реакционную способность.
Поскольку двойные спирали РНК в сплайсосоми короткие, они требуют дополнительной стабилизации. Кроме того, во время сбора и функционирования сплайсосомы определенные спирали должны быть разрушены и заменены на другие. Обе операции обеспечиваются белками сплайсосомы.
Итак, роль белков сплайсосомы сводится к:
• раскрутки двойных спиралей РНК АТР-зависимыми геликазамы;
• стабилизации двойных спиралей и общей пространственной структуры сплайсосомы белками со специфическим сродством к РНК;
• регуляции сплайсинга? блокирование или усиление эффективности сбора сплайсосомы на данном интроны белками-регуляторами сплайсинга (SR, Splicing Regulators). Скорость сбора сплайсосом определяется скоростью транскрипции. С другой стороны, из сплайсосомою взаимодействуют факторы элонгации транскрипции? наличие сплайс-сайта способствует ускорению движения полимеразы. Такой процесс синтеза РНК и ее сплайсинга продолжается до того момента, пока в составе пре-РНК не является специфическая последовательность? сигнал терминации.