В литературе имеются данные о введении молекул, в том числе ДНК, в клетки с помощью «теней» эритроцитов (Рекстейнер М., 1985) и липосом (Штраубингер Р., Папахаджопулос Д., 1985). Так, Серовым А.Л. (1985) в
лаборатории генетических основ онтогенеза Института цитологии и генетики СО АН СССР была выполнена экспериментальная работа по включению в искусственные мембраны изолированных интерфазных ядер с целью обеспечения сохранения генетического материала от деградации и индуцирования трансформации изолированных ядер в реципиентни клетки. По данным Серова А.Л., интерфазных ядра, выделенные из культуры фибробластов норки, суспендувалы в многокомпонентной буферном растворе, включающий различные концентрации KCl, NaCl, трис-HCl, ЭДТА, сахарозы и спермидина.
Для создания искусственной мембраны вокруг ядер использовали фосфатидилэтаноламин в концентрации 10-20 мг / мл и фосфатидилхолин, полученный из желтков куриных яиц, в концентрации 150-200 мг / мл органического растворителя. Предложенный Серовым А.Л. метод основан на образовании фосфоли-Поднять мембраны при прохождении изолированных ядер через трехслойную систему, находящуюся в центрифуговий пробирке с раствором 1М сахарозы, содержащейся на дне центрифуговои пробирки, водным раствором 0,25 М сахарозы, что формирует верхний слой, и слоем органического растворителя , состоящий из хлороформа, диоксан и этилацетата в соотношении 0,25:0,23:0,51 и фосфатидилхолина в концентрации 150-200 мг / мл указанного органического растворителя, занимает в центрифуговий пробирке положение между верхним и нижним слоями сахарозы.
На рубеже трехкомпонентного органического растворителя с верхним сахарозный слоем молекулы фосфатидилхолина ориентированы своими гидрофильными концами в сторону водного слоя, на границе органического растворителя с нижним сахарозный слоем молекулы фосфолипида также будут ориентированы своими полярными головками к водной фазы более плотного нижнего сахарозный слоя. При центрифугирования ядра при переходе из водной (0,25 М сахарозы) в слой органического растворителя на границе раздела фаз встречаются с полярными гидрофильными головками молекул фосфатидилхолина, который формирует однослойную липидную мембрану на поверхности интерфазных изолированных ядер. На рубеже органического слоя с более плотным слоем 1М сахарозы ядра, которые уже имеют на своей поверхности однослойную липидную мембрану, ориентированную гидрофобными концами наружу, встречаются со слоем молекул фосфатидилхолина, гидрофобные концы которых направлены в сторону органической фазы и взаимодействуют с гидрофобными концами липидного монослоя ядер, образуя при этом второй слой мембраны на поверхности интерфазных ядер.
Сформированный липидный бислой прочно удерживается на поверхности интерфазных ядер и не смывается при многократных пере-осаждения путем центрифугирования через раствор 1М сахарозы. С помощью радиоавтографии и флуоресцентной микроскопии было показано, что липидный бислой равномерно распределяется на поверхности ядра, формируя дополнительную мембрану или мембраны (при указанных условиях центрифугирования свободные липосомы в ядерную фракцию попасть не могут).
В результате дополнительных экспериментов было показано, что искусственно созданная мембрана не является совершенной (Серов О.Л.). Такой вывод, сделанный на основании выявления выхода из ядер, окруженных фосфатидилхолиновою мембраной, АТФ и проникновения в эти ядра экзогенной ДНКазы. Одновременно было установлено, что в обоих случаях образована мембрана блокировала транслокация как макромолекул (ДНКаза), так и обычных молекул сравнительно небольших размеров (АТФ). Между тем известно, что природные ядерные мембраны проникновенные даже для полимерных молекул; искусственная мембрана, созданная фосфатидилхолина, совсем непроницаемая как для крупных полярных молекул, так и для макро-лекулярних структур.
В результате проведенных экспериментов было высказано мнение, что фосфатидилхолин экзогенного происхождения формирует мембранную структуру вокруг ядра, в связи с чем оно проявляется заключенным в липосомы, которая, будучи дополнительной мембраной, накладывает определенные ограничения на перенос некоторых молекул в ядро и обратно, но вполне эти процессы не прекращаются. При введении интерфазных ядер норки, окруженных искусственной мембраной, в культуру LMTK - клеток мыши, которые характеризуются дефицитом фермента тимидинкиназы (ТК), установлено переноса в реципиентни мышиные клетки сравнительно больших фрагментов ДНК из ядер норки, а большинство исследованных трансформаторов характеризовались стабильным ТК + фенотипом .
Предлагаемый метод переноса генетического материала с помощью интерфазных ядер, находящихся в липосомы, благодаря высокой частоте трансформации по сравнению с методом переноса генов в составе суммарной клеточной ДНК свидетельствует о возможной защитную функцию ядерных белков донора, защищающие ДНК от деградации, а также об участии этих белков в интеграции донорского хроматина и хроматина реципиентных клеток.