Стадии взаимодействия цитотоксических Т-лимфоцитов с клетками-мишенями. В экспериментальных исследованиях Т-клеточного цитолиза с использованием двух тестов - адсорбция лимфоцитов на монослое клеток-мишеней и
образования комплексов ЦТЛ - клетка-мишень во время осаждения смеси клеток центрифугированием с последующим ресуспендирования осадка в вязкой среде было выяснено последовательность событий, приводит к гибели клеток-мишеней.
Процесс взаимодействия ЦТЛ и клетки-мишени условно разделяют на три стадии, происходят последовательно: стадия 1 - распознавание ЦТЛ клетки-мишени и установления контакта между клетками, взаимодействуют; стадия 2 - программирование лизиса (смертельный удар) - запуск политически механизма; стадия 3 - лизис клетки-мишени - реализация политически механизма. Каждая стадия взаимодействия реализуется при определенных условиях. Отличаются они прежде всего по степени зависимости от двухвалентных катионов. Для установления плотного контакта между ЦТЛ и клеткой-мишенью необходимо наличие катионов Mg2 +. Запуск цитолитачного механизма происходит только при наличии в среде катионов Са +. Однако лизис клетки может происходить и при отсутствии катионов. Различия в потребностях катионов позволяют отделять стадии друг от друга и детально их изучать. 2 +
При изучении лета ного. Цикла использовали так называемый Са-пульсовое метод с применением катионов Са и Mg и ЭДТА. Если в среду со смесью ЦТЛ и клеток-мишеней добавляли только катионы Mg +, то происходило связывание без программирования лизиса, а последующее введение катионов Са + запускало смертельный удар. Продолжительность цие стадии определяли введением в разные периоды времени ЭДТА, который разъединяет конъюгат ЦТЛ - клетка-мишень.
Распознавание клетки-мишени ЦТЛ осуществляется с помощью ТКР (с участием корецептора CD8), который связывает на поверхности клетки-мишени комплекс антигенного пептида с молекулой МЧС И. Ц связывания определяет специфичность взаимодействия. Установлению тесного контакта между клетками, что является необходимым условием реализации цитотоксического действия, способствующие взаимодействию экспрессированных на поверхности обеих клеток комплементарных молекул адгезии. Среди последних важное значение имеют связанные с функцией ЦТЛ молекулы LFA-1 (CD11a/CD18) и LFA-2 (CD2), которые распознают экспрессированных на клетке-мишени соответственно молекулы ИСАМ-1 и LFA-3 (CD58). Сближение клеток происходит в два этапа: первый осуществляется + с участием микрофиламентов (подавляется цитохолазином А) и не зависит от наличия ионов Mg +, второй - Mg2 +-зависимый. Запуск политически механизма (программирование лизиса) - метаболически активный процесс. Он развивается при температуре 37 ° С и наличия энергетического метаболизма, сохранение активности цитоскелета и ферментов ЦТЛ и подавляется ингибиторами метаболизма (азид натрия, динитрофенол) и низкими температурами. В ЦТЛ происходит реорганизация элементов цитоскелета и цитоплазматических гранул перемещения и концентрирования гранул под мембраной в месте контакта с клеткой-мишенью и ориентация в направлении к ней аппарата Гольджи и центра организации микротрубочек. На стадии программирования лизиса в клетке-мишени индуцируются Т-киллером процессы, которые неизбежно приводят ее к гибели, с чем и связано второе название ее - смертельный удар. Деструкция клетки-мишени происходит после отделения от нее ЦТЛ. Готовность к лизису после получения смертельного удара сохраняется в клетки-мишени до 5 часов при условии охлаждения ее до 15 ° С. Для осуществления лизиса нужна температура не ниже 30 ° С (максимальный эффект при 37 - 41 ° С). Итак, ЦТЛ не принимает непосредственного участия в деструкции клетки - мишени, а лишь запускает в ней цитолитический механизм.