Кишечный иерсиниоз и псевдотуберкулез - острые инфекционные заболевания, протекающие с преимущественным
поражением желудочно-кишечного тракта. Возбудители принадлежат к семейству Enterobacteriaceae, рода Yersinia (Y.pseudotuberculosis и Y. enterocolitica).
Микробиологической диагностики этих заболеваний используют микроскопический, бактериологический, серологический и аллергологический методы.
Материалом для исследования кровь, моча, стул, продукты питания.
Микроскопический метод. В мазках, изготовленных из испражнений, мочи и крашеных по Граму Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica имеют вид безспорових грамотрицательных палочек размером от 1-3 - 0,5-0,8 мкм. Оба вида бактерий подвижные при температуре 18-20ºС и неподвижные при температуре 37 ° С.
Бактериологический метод. Основан на выделении возбудителя, как правило, с каловых масс больного. Сначала материал для исследования высевают в жидкие среды накопления (фосфатно-буферный раствор, 1% пептонная вода) и выдерживают в холодильнике при температуре 5-6 ° С для накопления иерсиний в микробных ассоциациях. При недостаточности питания и низкой температуре иерсинии накапливаются быстрее других энтеробактерии. На 3-5 сутки выполняют висел из среды накопления на чашки Петри со средами Эндо, Плоскирева, Серова, предварительно обработанные слабым раствором щелочи, и помещают в термостат для культивирования.
Y. enterocolitica на плотных средах образует мелкие, круглые, выпуклые блестящие колонии с ровными краями, с блакитино-серым оттенком. В процессе старения колонии сливаются и растут сплошь. На среде Эндо образуются колонии с розовым оттенком. В редких питательных средах наблюдают диффузный рост в виде помутнения.
Y. pseudotuberculosis образуют как S- так и R-формы колоний. S-формы Y. pseudotuberculosis - мелкие, блестящие, серовато-желтые и менее прозрачные чем в Y. enterocolitica. На среде Эндо колонии бесцветные. R-формы - выпуклые, бугристые, средних размеров, часто с фестончатыми краями. В процессе старения колонии увеличиваются в размерах и теряют свою прозрачность. В жидкостных питательных средах иерсинии дают диффузный рост в виде помутнения или в виде осадка хлопьев, оставляя среду прозрачным. Отбирают подозрительные колонии, выросшие и изготавливают из них мазки, которые окрашивают по Граму, микроскопируют. Часть колонии, которая остались, пересевают на скошенный питательную среду для накопления чистой культуры микробов. Пробирки помещают в термостат на 48-72 часов при температуре 22-30 ° С.
Полученную чистую культуру микроорганизмов высевают в пестрый ряд Гиса для изучения биохимических свойств.
Иерсинии не образуют сероводорода, проявляют уреазная активность. Ферментируют большинство углеводов, исключая лактозу и мычать, без образования газа. В иерсиний псевдотуберкулеза реакция Фогеса-Проскауера всегда отрицательная, тогда как в кишечных иерсиний при температуре 22-28 ° C она положительная. Псевдотуберкульозни микробы от кишечных иерсиний отличаются по отношению к сахарозы и рамнозы, лизабельнистю псевдотуберкульозним бактериофагом и аглютинабельнистю соответствующими видовыми сыворотками.
Для изучения антигенных свойств выполняют реакцию агглютинации на стекле с адсорбированной диагностической сывороткой при разведении 1:10. Результаты оценивают через 3-5 минут.
Серологический метод. С целью выявления специфических антител в крови больного используют реакцию агглютинации и реакцию пассивной гемагглютинации (см. Приложение). Исследуют парные сыворотки, отобранные в начале и на 3-й неделе заболевания. Развернутая РА типа Видаля выполняется с соответствующими диагностикумами. Реакцию считают положительной при титре антител 1: 200 и выше. Реакцию пассивной гемагглютинации (РПГА) ставят с эритроцитарных псевдотуберкульозним и кишковоиерсиниозним диагностикумами. РПГА считается положительной при титре 1: 160 - 1: 200 и выше.
При исследовании парных сывороток, наиболее вероятным считают прирост титров антител в 4 раза и больше.
В экспресс-диагностике псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза для выявления антигенов иерсиний в материале, который исследуется, в первые дни заболевания может быть использован ИФА (см. Приложение).
Аллергологический метод. Для постановки внутрикожной пробы * используют алергодиагностични препараты "псевдотуберкулин" и "ентероиерсин". Учет пробы проводят через 24 часа. Реакция считается положительной, если в месте введения 0,1 мл аллергена образуется папула и зона гиперемии диаметром 10 мм и более.